遵义医科大学从属病院闭节外科宝运莱网分享：创伤性大鼠骨髓炎模

　　将金黄色葡萄球菌ATCC25923(遵义医科大附属医院检验科提供)标准株接种于血琼脂平板上，37 ℃恒温培养箱中孵育24 h后取出，接种环无菌挑取单个菌落至15 mL的氯化钠肉汤(青岛海博生物，中国)培养液中，并置于37 ℃的恒温摇菌箱中孵育18 h，调整细菌浓度到1×107 CFU/mL，取直径为1 mm、长度为5 mm无菌克氏针放置于细菌悬液中，继续于恒温摇菌箱中孵育18 h，用结晶紫(索莱宝，中国)染色克氏针证实有细菌生物膜形成[12]，见

　　2 骨髓炎模型制作腹腔注射3%戊巴比妥钠(遵义医科大学附属医院提供)30 mg/kg以麻醉大鼠。麻醉生效后固定大鼠四肢，右下肢备皮，碘伏消毒术区，铺一次性无菌治疗巾，在膝关节下沿胫骨前嵴内侧切开长约1 cm切口，在胫骨前肌内侧进入达骨膜，显露胫骨上端的前外侧面胫骨嵴，小心刮开骨膜，用直径1.5 mm钻头的手钻在此处钻骨洞，用小刮匙探查去除松质骨，将制备的带细菌生物膜克氏针头插入胫骨髓腔后用骨蜡将骨窗封闭，生理盐水反复冲洗后逐层缝合伤口，予单笼饲养，造模后观察4周宝运莱官方网，见图2宝运莱官方网。

　　体温检测：造模前检测大鼠体温情况，造模后1周连续检测大鼠体温变化，采用肛测法测量大鼠体温宝运莱官方网，将体温计探头置入大鼠肛门内距肛门口1.5-2.0 cm深度，约20 s后读数，对比术前术后大鼠体温变化情况。

　　影像学检查：造模后第4周后所有大鼠行X射线(遵义医科大学附属医院影像科)检测造模部位，采用正、侧位摄片，观察骨组织愈合情况。

　　大体标本情况：造模后第4周过量麻醉处死大鼠，将大鼠造模胫骨取下去除软组织，观察骨洞愈合情况，有无隧道形成及流脓。

　　骨病理苏木精-伊红染色：将骨胫骨放入EDTA脱钙液(索莱宝，中国)脱钙，每天更换脱钙液，用细针试探脱钙程度，待可轻松刺入骨皮质时为宜，将标本送至遵义医科大学附属医院病理科行石蜡包埋病理切片并行苏木精-伊红染色。

　　细菌培养及鉴定：将大鼠处死后无菌取钻孔部位分泌物涂到血琼脂平板进行画线培养，观察有无细菌菌落生长，将培养出的细菌利用质谱仪(全自动快速微生物质谱检测系统，Automated microbial identification system，法国)进行质谱鉴定，鉴定是否为克氏针上所接种细菌导致感染。

　　炎症因子检测：造模前后检测炎症因子，造模前采取大鼠尾部采血法，造模第4周戊巴比妥麻醉大鼠后，心脏采血法抽取血液，用无菌管收集，室温血液自然凝固10-20 min，2-8 ℃条件离心20 min左右(2 000-3 000 r/min)，仔细收集上清，用大鼠降钙素原、肿瘤坏死因子α以及白细胞介素10的Elisa盒子(Elabscience，中国)进行检测，使用多功能酶标仪(SpectraMax M2e，美国)检测吸光度并计算浓度，对比造模前后大鼠炎症因子变化情况。

　　大鼠体温变化、切口愈合及流脓情况、影像学检查、大体骨标本钻孔愈合情况、细菌培养、骨组织苏木精-伊红染色病理学及炎症因子检测。